组织工程医疗产品第7部分:壳聚糖-脱乙酰度的测定（双突跃电位滴定法）

YY/T 0606.7-2008 组织工程医疗产品 第7部分: 壳聚糖

范围
YY/T 0606 的本部分规定了用于制备组织工程医疗产品的壳聚糖原料的要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存等要求。
本部分适用于壳聚糖及其盐类，可用于制备组织工程医疗产品。

术语和定义
下列术语和定义适用于 YY/T 0606 的本部分。
壳聚糖  chitosan
由2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖(GlcNAc)和2-氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖(GlcN) 通过ß (1→4)连接而成的线性多糖?？蔷厶鞘怯杉卓撬赝ü袾-脱乙?；饔蒙傻亩嗵?。
脱乙酰度  degree of deacetylation
一个壳聚糖分子中葡萄糖胺单元(脱乙?；牡ピ?的摩尔分数。

分类
壳聚糖按照溶解性质不同可分为酸溶性壳聚糖和水溶性壳聚糖。
壳聚糖盐类可分为壳聚糖盐酸盐、壳聚糖醋酸盐和壳聚糖谷氨酸盐。

原材料和工艺要求
动物源性的壳聚糖和壳聚糖盐，应按照 YY/T 0771.1、YY/T 0771.2、YY/T 0771.3 的要求进行管理和控制。
稳定性: 结合高分子材料的功能来描述壳聚糖的稳定性，应考虑黏度(表现黏度和特性黏度)和分子量在规定储存条件下的变化。
灭菌方法对分子量的影响: 无论选择γ 射线灭菌、过滤灭菌或湿热灭菌， 应该考虑灭菌方法对分子量的影响，分子量变化会导致黏度变化。选择这些灭菌方法需要考虑产品的终用途，确保黏度或者分子量在规定的范围内。
注: 这里的原材料是指制备壳聚糖原料所用的蟹壳、虾壳等动物源性材料。

要求
性状
白色或淡黄色粉末状、丝状或片状的固体。
脱乙酰度
标示值的90%~110%。

试验方法
脱乙酰度
脱乙酰度可采用以下方法测定，但不限于以下方法， 结果应符合规定。

酸碱滴定法
准确称取在105°C下干燥至恒重的样品0.2g~0.5g，置于250mL锥形瓶中，加入标准0.1mol/L的盐酸溶液30mL，在20°C~25°C下搅拌至*溶解(可加入适量蒸馏水稀释)。加入5~6滴甲基橙苯胺蓝(将0.1%的甲基橙水溶液和0.1%苯胺蓝水溶液以1:2体积比混合)为指示剂，用标准氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴至变成浅蓝色。按式(1)和式(2)计算:

式中:
p 一一样品中氨基含量，%；
c₁一一盐酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
V₁一一盐酸标准溶液的体积，单位为升(L)；
c₂一一氢氧化钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
V₂一一氢氧化钠标准溶液的体积，单位为升(L)；
0.016一一与1mL 1mol/L盐酸溶液相当的氨基量；
m 一一样品质量，单位为克(g)；
D 一一样品的脱乙酰度，%。

双突跃电位滴定法
准确称取在105°C下干燥至恒重的样品0.2g~0.5g，加入过量的0.1mol/L盐酸(HCl)，搅拌至*溶解。然后在电位滴定装置上用氢氧化钠(NaOH)标准溶被滴定，氢氧化钠(NaOH)溶液首先中和过量的盐酸(HCl)，pH出现急剧上升，即首先突变，然后氢氧化钠(NaOH)标准溶液再中和与壳聚糖一NH₂结合的盐酸(HCl)，达到滴定等当点时，pH出现第2个突变，两个突跃点消耗的氢氧化钠(NaOH)摩尔数相当于样品中的一NH₂摩尔数。按式(3)计算:

式中:
D 一一样品的脱乙酰度，%；
ΔV一一两突跃点之间消耗的氢氧化钠(NaOH)标准溶液体积之差，单位为毫升(mL)；
c_NaOH一一NaOH标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
m 一一样品质量(去除水分)，单位为克(g)；
16一一氨基的相对分子质量；
0.0994一一理论氨基含量。
注: 以方法 "双突跃电位滴定法" 为仲裁方法。


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