饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定

GB/T 8622-2006 饲料用大豆制品中尿素酶活性的测定

范围
本标准规定了大豆制品及其副产品中尿素酶活性的测定。
本标准适用于大豆、由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。此方法可了解大豆制品的湿热处理程度。

术语和定义
下列术语和l定义适用于本标准。
大豆制品中尿素酶活性  urease activity soya bean products
在30°C±0.5°C和pH7的情况下，每克大豆制品每分钟分解尿素所释放的氨基氮的质量。
注: 以尿素酶活性单位每克(U/g)表示。

原理
将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30°C±0.5°C下精.确保温30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。

仪器设备
粉碎机: 粉碎时应不生强热。
样品筛: 孔径200μm。
分析天平: 感量: 0.1mg。
恒温水浴: 可控温30°C±0.5°C。
计时器。
酸度计: 精度0.02，附有磁力搅拌器和滴定装置。
实验室常用玻璃仪器。

试剂和溶液
试剂为分析纯，水应符合 GB/T 6682 的规定。
尿素缓冲溶液(pH7.0±0.1)
称取8.95g磷酸氢二钠Na₂HPO₄•12H₂O)，3.40g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲液中，有效期1个月。
盐酸溶液[c(HCl)=0.1mol/L]
移取8.3mL 盐酸，用水稀释至1000mL。
氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.1mol/L]
称取4g氢氧化钠溶于水并稀释至1000mL，按 GB/T 601 规定的方法配制和标定。
甲基红、溴甲酚绿混合乙醇溶液
称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇并稀释至100mL，再称取0.5g溴甲酚绿，溶于95%乙醇并稀释至100mL，两种溶液等体积混合，储存于棕色瓶中。

试样的制备
用粉碎机将具有代表性的样品粉碎，使之全部通过样品筛。对特殊样品(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的样品)应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。

测定步骤
称取约0.2g制备好的试样，精.确至0.1mg，于玻璃试管中(如活性很高可称0.05g试样)，加入10mL尿素缓冲液，立即盖好试管盖剧烈振摇后，将试管马上置于30°C±0.5°C恒温水浴中，计时保持30min±10s。要求每个试样加入尿素缓冲液的时间间隔保持一致。停止反应时再以相同的时间间隔加入10mL盐酸溶液，振摇后迅速冷却至20°C。将试管内容物全部转入小烧杯中，用20mL水冲洗试管数次，以氢氧化钠标准溶液用酸度计滴定至pH4.70。如果选择用指示剂，则将试管内容物全部转入250mL锥形瓶中加入8滴~10滴混合指示剂，以氢氧化钠标准溶液滴定至溶液呈蓝绿色。
另取试管作空白试验。称取约0.2g 制备好的试样精.确至0.1mg，于玻璃试管中(如活性很高可称0.05g试样)，加入10mL盐酸溶液，振摇后再加入10mL尿素缓冲液，立即盖好试管盖剧烈振摇，将试管马上置于30°C±0.5°C恒温水浴中，计时保持30min±10s。停止反应时将试管迅速冷却至20°C。将试管内容物全部转入小烧杯中，用20mL水冲洗试管数次，以氢氧化钠标准溶液用酸度计滴定至pH4.70。如果选择用指示剂，则将成管内容物全部转入250mL锥形瓶中加入8滴~10滴混合指示剂，以氢氧化钠标准溶液滴定至溶液呈蓝绿色。

结果计算
大豆制品中尿素酶活性X，以尿素酶活性单位每克(U/g)表示，按式(1)计算。若试样经粉碎前的预干燥处理后，则按式(2)计算:

式中:
X 一一试样的尿素酶活性，单位为活性单位每克(U/g)；
c  一一氢氧化钠标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
V₀一一空白消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；
V  一一试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)；
14一一氮的摩尔质量，M(N₂)=14g/mol；
30一一反应时间，单位为分钟(min)；
m 一一试样质量，单位为克(g)；
S  一一预干燥时出样失重的质量分数，%。
计算结果表示到小数点后两位。
重复性: 同一分析人员用相同分析方法，同时或连续两次测定活性≤0.2时结果之差不超过平均值的20%，活性>0.2时结果之差不超过平均值的10%，结果以算术平均值表示。


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